Ko te PCR ine ine-a-wa-a-tika he tikanga mo te ine i te tapeke o te hua i muri i ia huringa polymerase chain reaction (PCR) i roto i te tauhohenga whakakaha DNA ma te whakamahi i te fluorophore.Ka whakamahia te tikanga ki te ine i nga raupapa DNA motuhake i roto i te tauira hei whakamatautau ma nga tikanga tohutoro o roto, o waho ranei.Mai i te timatanga, kua kaha ake te rongonui o nga whakamatautau PCR ine korakora ki nga kaiako taiwhanga.
Tikanga PCR Fluorescence: Ko te Fluorescence PCR, i kiia tuatahi ko TaqManPCR, i muri mai ano hoki i te Real-TimePCR, he tikanga inenga waikawa karihi hou i whakawhanakehia e PE (PerkinElmer) i te USA i te tau 1995. Ko te tikanga i hangai i runga i te taapiri o te tirotiro kua tapaina ki te rekoata, he rite ranei. te waikano rewharewha ki PCR tikanga hei whakatutuki i tana mahi ine.Ko te kaupapa: ka puta te tauhohenga PCR, ka whakaemihia nga hua tauhohenga PCR ka piki te kaha o te tohu rewharewha ki te riterite.I ia huringa, ka kohia he tohu kaha o te korikori kia taea ai e tatou te aro turuki i te huringa o te nui o nga hua ma te huringa o te kaha o te koorero, na reira ka whiwhi kauwhata koorero whakakaha.
I te nuinga o te waa, ka taea te wehewehe i te pihi whakakaha o te koorero ki nga wahanga e toru: ko te wahanga tohu tohu papamuri, ko te waahanga whakahiatotanga o te tohu korikori me te waahanga paparahi.I roto i te wahanga tohu tohu papamuri, ka hunahia te tohu rewharewha whakahiato e te tohu papamuri karekorero me nga huringa o te rahinga hua kaore e taea te whakatau.I te wahanga paparahi, kua kore te hua whakakaha e piki ake, kaore he hononga raina i waenga i te nui o te hua mutunga me te rahinga tauira timata, a kaore e taea te tatau te nama kape DNA timata i runga i te nui o te hua PCR whakamutunga.I roto noa i te wahanga whakakaha tauputanga o te tohu rewharewha he hononga raina i waenga i te logarithm o te rahinga hua PCR me te rahinga tauira timata, a ka taea e tatou te whiriwhiri ki te tatau i tenei i tenei wahanga.Mo te pai o te ine me te whakataurite, e rua nga ariā tino nui kua whakauruhia ki roto i te tikanga PCR ine-a-wa-wa-tika: ko te paepae korikori me te uara CT.
Ko te paepae he uara kua tautuhia hangai i runga i te ananga whakakaha o te korikori.wāhanga taupū o te whakakaha PCR.
Uara Ct: ko te maha o nga huringa i mahia e te tohu rewharewha o ia ngongo tauhohenga kia eke ki te uara rohe kua whakaritea.
Te hononga i waenga i te uara Ct me te tauira timatanga: kua kitea e nga rangahau he hononga raina te uara Ct o ia tauira me te taukohiko o te tau kape timatanga o taua tauira, ka nui ake nga kape o te nama kape timatanga, ka iti ake te Ct uara.He rite tonu nga uara Ct.Ka taea te hanga anau paerewa ma te whakamahi i te paerewa me te tau kape timatanga e mohiotia ana, ko te taunga whakapae e tohu ana i te taukohiko o te tau kape timatanga me te taunga poutū hei tohu i te uara Ct penei i te ahua i raro nei.
Na reira, ma te whiwhi i te uara Ct o tetahi tauira e kore e mohiotia, ka taea te tatau i te tau kape timatanga o taua tauira mai i te pihi paerewa.
Ko te uara Ct ehara i te mea pumau, ka taea te awe e nga tauira rereke me nga taputapu rereke, ahakoa ka tuaruatia te tauira kotahi i runga i te taputapu kotahi, ka rereke te uara Ct.
Te taima ine ine: Ka taea te wehewehe i te whakamaarama ine ine ki roto i nga rangahau koorero me nga waikano koorero i runga i nga tohu i whakamahia.Kei roto i nga rangahau korikori te hangarau Beacon (hangarau rama rama rapoi, e tohuhia ana e Amerika Tagyi), nga rangahau TaqMan (e tohuhia ana e ABI) me te hangarau FRET (e tohuhia ana e Roche);ko nga waikano koorero ko nga waikano koorero kukū me nga waikano kookoro kore-makuku, ko te tohu o nga waikano kookorokore ko SYBRGreen I, e whakamahia nuitia ana inaianei;kua kukū Ko te ahua o nga waikano korikori-kore ko SYBRGreenⅠ;Ko nga waikano kowhai ko EvaGreen, LCGreen, aha atu.
Ko te SYBRGreenI he waikano here DNA e whakamahia nuitia ana mo te PCR karerewharewha, he here kore-motuhake ki te DNA whenu-rua.I roto i tona ahua kore utu, ka tukuna e te SYBRGreenI te ngoikore ngoikore, engari i te wa ka herea ki te DNA taurua-rua, ka piki ake te 1000-fold.Na reira, ko te tapeke o te tohu rewharewha e tukuna ana e te tauhohenga he rite ki te nui o te DNA whenu-rua e noho ana, ka piki ake i te pikinga o te hua whakakaha.
Ko nga painga o nga waikano here DNA paerua: he hoahoa whakamatautau ngawari, e 2 noa nga mea tuatahi e hiahiatia ana, kaore he take ki te hoahoa rangahau, kaore he hiahia ki te hoahoa i nga rangahau maha mo te whakamatautau tere o nga ira maha, te kaha ki te mahi tātari i te pihi rewa, te whakamatautau i te motuhake o te te tauhohenga whakakaha, he iti te utu tuatahi, he pai te whaanui, no reira ka whakamahia nuitia i roto i nga rangahau i te kainga me nga whenua o waho.
Tikanga rangahau kareoro (Tuhinga Taqman): Ka mahia ana te whakakaha PCR, ka taapirihia he rua o nga tohu tuatahi me tetahi rangahau kareoro motuhake.I te wa e mau tonu ana te rangahau, ko te tohu rewharewha e tukuna ana e te roopu kairipoata ka uru ki te roopu kua tineia, kaore e kitea e te taputapu PCR;i te wa e whakanuia ana te PCR (i te wahanga toronga), ko te 5'-3' mahi wehenga o te enzyme Taq e whakaheke ana i te rangahau ma te enzymatically, e hanga ana i te roopu reipoata kairipoata me te roopu rewharewha tineia.
Nga tono mo te PCR ine ine korakora.
Rangahau koiora rāpoi:
1. Te tātari waikawa karihi ine.Te tātari ine me te kounga o nga mate hopuhopu, te kitenga o nga microorganisms pathogenic, wheori ranei, penei i te mate rewharewha A (H1N1) tata nei, te kitenga i nga tau kape ira o nga tipu me nga kararehe whakawhiti, te kitenga o te reeti tauhohenga ira RNAi, aha atu.
2. Te tātari ira ira rereke.Te whakataurite i nga rereketanga o te whakaputanga ira i waenga i nga tauira kua rongoatia (hei tauira, te maimoatanga tarukino, te maimoatanga tinana, te maimoatanga matū, me etahi atu), te rereketanga o nga whakaaturanga o nga ira motuhake i roto i nga waahanga rereke me te whakapumautanga o te cDNA microarray, nga hua whakaaturanga rereke ranei
3. Te kitenga SNP.Ko te kitenga o nga polymorphism nucleotide kotahi he mea nui mo te ako mo te whakaraeraetanga o te tangata ki nga mate rereke, ki te whakautu takitahi ranei ki nga raau taero motuhake, a, na te hanga mohio o nga rama rama rapoi, ka mohiotia nga korero raupapa o te SNP, he ngawari me te tika whakamahia tenei tikanga mo te rapu SNP teitei.
4. Te kimi methylation.He maha nga mate o te tangata e pa ana ki te methylation, ina koa ko te mate pukupuku, a, i kii a Laird i tetahi tikanga e kiia nei ko Methylight, e rongoa ana i te DNA i mua i te whakakaha ake kia noho ai te cytosine kore-metilated hei uracil me te cytosine methylated kia kore e pangia, ma te whakamahi i nga tohu tuatahi me nga rangahau Taqman hei wehe i waenga i te methylated me te DNA unmethylated. .tairongo ake.
Rangahau rongoa:
1. Te tātaritanga i mua i te whanautanga: e kore e taea e te tangata te rongoa i nga mate tuku iho na te whakarereketanga o nga taonga ira, a, i tenei wa, ka taea e ratou te whakaiti i te maha o nga peepi mate i whanau ma te tirotiro i te whanautanga kia kore ai e puta nga momo mate tuku iho.He tikanga kore-ahuru tenei ka ngawari te whakaae e nga wahine hapu.
2. Te kitenga o te mate: Ko te whakamaarama PCR ine karema ka taea te whakatau ine ine o nga tukumate penei i te gonococcus, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma solium, huaketo papilloma tangata, huaketo herpes simplex, huaketo immunodeficiency tangata, huaketo hepatitis, huaketo rewharewha, Mycobacterium tuberculosis, EBV me cytomegalovirus.Kei a ia nga painga o te tairongo teitei, te iti o te tauira tauira, te tere me te ngawari ka whakaritea ki nga tikanga whakamatautau tuku iho.
3. Aromatawai i te kaha o te raau taero: ko te tātaritanga ine o te huaketo kakā B (HBV) me te huaketo kakā C (HCV) e whakaatu ana ko te hononga i waenga i te uta huaketo me te kaha o etahi raau taero.Mena ka heke te taumata serum o te HBV-DNA i te wa o te maimoatanga o te lamivudine ka piki ano, ka nui ake ranei i te taumata o mua, he tohu tenei mo te huringa huaketo.
4. Te whakamatautau oncogenetic: Ahakoa kaore ano kia marama te tikanga o te whakawhanaketanga o te pukupuku, e whakaaehia ana ko nga huringa i roto i nga ira e tika ana te take o te huringa oncogenic.Ka kitea te pikinga ake o te whakaaturanga me te whakarereketanga o te oncogenes i te timatanga o te maha o nga pukupuku.Ko te PCR ine-a-wa-a-waa e whai hua ana ki te kite i nga huringa ira ira, engari ka taea hoki te kite tika i te whakaaturanga o te oncogenes.I whakamahia tenei tikanga ki te kite i te whakaaturanga o nga momo momo ira tae atu ki te ira telomerase hTERT, te ira WT1 leukemia granulocytic tawhito, te ira ER oncogenic, te ira PSM mate pukupuku prostate, me nga ira viral e pa ana ki te pukupuku.
I whakamaoritia me www.DeepL.com/Translator (putanga kore utu)
Wā tuku: Hune-21-2022